嘔吐毒素也稱為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON),是由串珠鐮刀菌、輪狀鐮刀菌以及多育鐮刀菌等產(chǎn)生的真菌毒素,大多存在于糧谷、飼料及其制品中。中毒后影響消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng),主要表現(xiàn)為嘔吐、頭痛、頭暈、腹痛、腹瀉等癥狀。我國標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定:玉米、大麥、小麥及其制品中嘔吐毒素不得超過1mg/kg,豬、犢牛、泌乳期動物配合飼料中嘔吐毒素不得超過1mg/kg,牛、家禽配合飼料中嘔吐毒素不得超過5mg/kg。
原理
測定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。微孔板上包被有抗抗體。加入嘔吐毒素(DON)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)抗原和抗體后,游離的嘔吐毒素與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合抗體,抗體或抗體結(jié)合物與固定在微孔板上的抗抗體再結(jié)合,沒有結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗原及抗體被洗去,加入TMB底物顯藍(lán)色,加入終止液后顏色由藍(lán)變黃,用酶標(biāo)儀在450nm處檢測,吸光值與樣品中嘔吐毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出嘔吐毒素的含量。
注意事項(xiàng)
室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫(20- 25℃)會導(dǎo)致數(shù)值偏低。
在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對光敏感,避免直接暴露在光線下。
混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn)液的時候都必需充分混合均勻)。
終止液為強(qiáng)酸性物質(zhì),避免接觸皮膚。
不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結(jié)果不準(zhǔn)確。
試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。